TALLER CIENTÍFICO DE BIBLIOTECA Nº27: TENDENCIAS DE NO TESTEAR EN ANIMALES EN EL MUNDO DE LA COSMÉTICA ACTUAL: ALCANCES Y LIMITACIONES.

El 11 de noviembre pasado organizamos una nueva edición del Taller Científico de Biblioteca. Se trató de una sesión diferente: una interesantísima y muy actual exposición sobre los métodos alternativos al uso de animales de laboratorio para el análisis de productos cosméticos. En algún momento en los años venideros Argentina tendrá que implementar finalmente estos métodos en la industria cosmética, de modo que este Taller se convirtió en una oportunidad única de consultar a expertos en el tema para irnos informando.

La disertante, María Laura Gutiérrez, es Licenciada en Ciencias Biológicas, Doctora por la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) e Investigadora Adjunta de CONICET en el Instituto de Farmacología de la Facultad de Medicina (UBA). Actualmente es Directora del Laboratorio de Métodos Alternativos a la Experimentación Animal, nodo de la Plataforma Tecnológica EBAL y es especialista en investigación, desarrollo e implementación de ensayos in vitro para la evaluación de seguridad de productos de uso humano. También nos acompañó Claudio Vilariño, responsable de vinculación tecnológica del grupo.

María Laura explica que los ensayos de toxicidad forman parte del proceso de evaluación de seguridad en las etapas de desarrollo y registro de productos cosméticos. Históricamente estos ensayos se realizan empleando animales de laboratorio. Por motivos éticos, desde hace décadas se viene fomentando el diseño de métodos alternativos. Se trata de metodologías que llevó mucho tiempo y dinero desarrollar. A la Unión Europea, por ejemplo, le llevó desde 1993 a 2013 obtener modelos validados, con una inversión de alrededor de 238 millones de euros. Estas tecnologías que surgieron en la línea del principio de las 3R (Reemplazo, Refinamiento y Reducción) y las metodologías NAM (New Approach Methodologies) deben ser validadas por instituciones de prestigio que fijan estándares de calidad y BPM. 

El Laboratorio de Métodos Alternativos (LMA), grupo de investigación del CONICET, implementa y capacita sobre tecnologías con validación internacional para la evaluación de seguridad de productos cosméticos, domisanitarios, fitosanitarios y farmacéuticos.

Durante el taller la disertante presentó metodologías validadas y utilizadas para analizar irritación ocular, irritación dérmica, sensibilización dérmica y fototoxicidad. Explicó los alcances, las ventajas y las desventajas de emplear estos ensayos en el mundo de la cosmética actual. En una extensa jornada que no dio tiempo a completar todo el programa por su complejidad y por la entusiasta participación de los concurrentes, la Dra. Gutiérrez presentó los principales métodos alternativos disponibles en el país, en un marco internacional preocupado por cumplir principios éticos del trato de animales tradicionalmente empleados en pruebas de laboratorio.

MÉTODOS PRINCIPALES

IRRITACIÓN OCULAR: La tradicional Prueba de Draize fue reemplazada por:

• HET-CAM (Hen’s Egg Test on ChoriAllantoic Membrane): Irritación ocular. Mide efectos vasculares sobre la membrana corioalantoidea de huevo de gallina (hemorragia, lisis vascular, hiperemia y formación de coágulos).

• BCOP (OECD TG 437): Daño ocular. Mide opacidad y permeabilidad de córneas bovinas. No es tan usado en cosmética.

• STE (Short Time Exposure): Mide citotoxicidad en la línea de córnea de conejo SIRC. Esta prueba está en proceso de revalidación para que incluya productos basados en tensioactivos. El LMA participará de este proceso, siendo la primera vez en hacerlo un laboratorio no europeo o norteamericano.

• CULTIVOS CELULARES 3D: Modelos de epitelios en 3D con células de córnea (RHCE - Reconstructed human Cornea-like Epithelium). 

IRRITACIÓN DÉRMICA: La prueba de Draize en piel de conejo rasurada fue reemplazada por una prueba validada:

• CITOTOXICIDAD EN EPIDERMIS RECONSTITUIDA 3D (RHE): Cultivos celulares 3D. Contiene dos protocolos de irritación y corrosión. Sólo el primero se aplica en cosméticos. Los epitelios humanos son reconstruidos a partir de células de bancos de donantes. En ambos casos se evalúa la citotoxicidad inducida por la exposición a la sustancia química en estudio. La muerte celular se cuantifica empleando MTT.

FOTOXICIDAD: Es la respuesta tóxica inducida por una sustancia producida por la exposición a la luz. Se observan tres grupos principales de reacciones cutáneas a la radiación UVA: Fotoalergia/Fotosensibilización; Fototoxicidad/Fotoirritación; y Fotogenotoxicidad. Esas sustancias pueden ser, por ejemplo, aceites esenciales, colorantes, extractos vegetales con furanocumarina, entre otras. El método disponible es:

• PRUEBA DE FOTOXICIDAD IN VITRO 3T3 NRU (OECD Guía 432):   Se utiliza la línea celular 3T3 de fibroblastos de ratón midiendo la captación de rojo neutro (colorante catiónico vital que se acumula en lisosomas).

El LMA también emplea otros ensayos que no llegamos a ver en el Taller y quedarán para otra oportunidad, como los ensayos de Sensibilización Dérmica. 

SENSIBILIZACIÓN DÉRMICA: Dermatitis alérgica por contacto: es una reacción del sistema inmune a una sustancia que se ha puesto en contacto con la piel. En ocasiones puede desarrollarse sensibilidad con una exposición; en otras, la sensibilización se produce después de repetidas exposiciones.

• DPRA - Evaluación de sensibilización dérmica - OCDE Guía 442C. Medición de la disminución de péptidos sintéticos.

• KeratinoSens TM - Evaluación de sensibilización dérmica - OCDE Guía 442D. Evaluación de la expresión de un gen reportero en la línea celular de queratinocitos humanos HaCaT.

• U-Sens - Evaluación de sensibilización dérmica - OCDE Guía 442E. Evaluación de la activación de la línea celular monocítica humana U937

El texto de este artículo se basa en el material y la exposición brindados en el Taller por el LMA.

DEBATE DEL TALLER

• ¿Cuál es el grado real de agresividad de las pruebas en animales que justifiquen su reemplazo por nuevos métodos alternativos en el caso de productos cosméticos? No son tan aberrantes comparado con las pruebas de productos de otros ámbitos (domisanitarios, farmacéuticos, médicos), pero si se observan irritaciones o daños en ojos de conejos que luego se dejan de usar.

• Las nieves de carnaval, consideradas producto cosmético por ANMAT, son uno de los productos que se someten a pruebas de irritación ocular en conejos.

• En la producción de polvo decolorante de cabello y alisadores a base de tioglicolatos se usan conejos para irritación ocular y se comentaron efectos anímicos y sentimientos de culpa en los analistas por el uso de estos animales.

• ¿Ya se pueden usar en Argentina estos métodos? Sí, no hay ningún problema en emplear los métodos validados ya que son aceptados por ANMAT. 

• Los ojos del conejo generan menos lágrimas que el ojo humano y se podría subestimar el nivel de daño producido por el producto.

• Para medir irritación dérmica en productos para bebés el ensayo HET-CAM es muy confiable, los mismo que los modelos de epitelios 3D. También se pueden complementar HET-CAM y STE.

• En Argentina ya hay empresas que comercializan los ensayos de modelos de epitelio 3D, aunque las plantas productoras están en Brasil.

• ¿Quiénes definen la cantidad y tipo de ensayos a emplear en el análisis? Sabiendo cuál es el producto a ensayar el laboratorio de análisis puede determinar los ensayos a aplicar. Como son métodos validados, ANMAT acepta su aplicación mientras sean los exigidos para cada tipo de producto. Se define caso por caso.

• ¿Qué ensayos puede hacer el LNA? ¿Son aceptados por ANMAT? ¿Puede CONICET certificar resultados? El LNA brinda informes de seguridad firmados aceptados por ANMAT, no actúa como certificadora en términos de reivindicaciones (claims) y rotulado. Salvo en aquellos casos de productos desarrollados y patentados por CONICET, solo o en sociedad con empresas.  El LNA realiza todos estos ensayos descriptos, los cuales pueden ser consultados en la website (metodos-alternativos.com.ar) 

• ¿Hay realmente modelos 3D que ya incluyen sistemas de irrigación e inervación? Sí, hay modelos microfisiológicos a base de microfluídica, pero aún no están validados. Son los métodos que se encuentran actualmente en el centro de la investigación y desarrollo. Por ahora son aceptados en investigación, pero no como método validado, ni siquiera en fármacos, porque debido a su complejidad aún muestran muy baja reproductibilidad. 

• ¿El análisis sin animales es sólo una tendencia? No, ya es un hecho, pero en Argentina aún no se aplica. En el primer mundo sí. 

• ¿Qué opinan los veganos de estos métodos? Los favoritos de los veganos son los de epidermis reconstituida. El más criticado es el de HET-CAM porque usa embrión de pollo y tiene un tiempo límite de uso.

• Para tener el logo oficial cruelty-free de PETA hay que someterse a la certificación y es muy caro. Hay una ONG, Te Protejo, que es más económica. Para ANMAT esto es nuevo y están analizando el tema.

• Se relata la experiencia de una empresa que empezó analizar este tema de la reivindicación “no testeado en animales” ya en 2012. 

• ¿Se están haciendo desarrollos para factor de protección solar en UVB? Sí, se hizo contacto con desarrolladores relacionados con una ISO que tienen un borrador junto a la empresa Coty. El LNA intentó involucrarse en el tema, pero es muy caro e equipamiento (alrededor de USD 250.000). 

• Felicitaciones al grupo del LNA por el grado de investigación a pesar de la falta de financiamiento.

LABORATORIO DE MÉTODOS ALTERNATIVOS (LNA)

Paraguay 2155 P. 9 C1121ABG, Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Instituto de Farmacología – Facultad de Medicina – UBA 

Tel.: +54 11 5285-3356

[email protected] 

metodos-alternativos.com.ar