OBJETIVOS
General: Utilizar fotoliasas recombinantes bacterianas de origen Antártico para la remoción de lesiones al ADN causadas por la radiación solar, específicamente los fotoproductos dímeros de ciclobutano de pirimidinas (CPDs) y de pirimidina-pirimidona ((6-4)-FP). Específicos: 1-Estudiar la remoción mediada por las fotoliasas, de CPDs y (6-4)-FP en líneas celulares derivadas de queratinocitos y melanoma. 2-Formular un Xerum conteniendo fotoliasas microbianas de origen antártico. 3-Evaluar la estabilidad en el tiempo de ambas enzimas en la formulación final. 4-Validar la penetrancia de las enzimas y del Xerum mediante ensayos ex vivo en piel humana.
MATERIALES Y MÉTODOS
Además del estrés oxidativo, la radiación solar genera fotoproductos, principalmente CPDs y (6-4)-FP. La remoción de fotoproductos se estudia mediante microscopía confocal e inmunoensayos del tipo ELISA, utilizando anticuerpos específicos para CPD y (6-4)-FP, empleando las líneas celulares modelo (queratinocitos HaCat y derivadas de melanocitos SK-MEL-28) transfectadas con CPD- y (6-4)-fotoliasas e irradiadas con luz UV. También se evaluará la penetración de las enzimas en las distintas capas de la piel y, el efecto en el fotoenvejecimiento, utilizando el servicio de KosmoScience. Finalmente, la estabilidad se estudia mediante ensayos de actividad enzimática y electroforesis.
RESULTADOS
Demostramos que la reparación de lesiones o fotoproductos en la línea celular HaCat, y actualmente estamos finalizando los ensayos de reparación de lesiones en la línea celular SK-MEL-28 (melanoma). Los resultados obtenidos hasta el momento son altamente alentadores.
CONCLUSIONES
Producimos fotoliasas que reparan ambos tipos de fotoproductos en forma recombinante, con bajo costo y alto rendimiento. Las enzimas remueven las lesiones causadas por la luz solar en diferentes líneas celulares. Estas enzimas constituirían una materia prima novedosa en la profilaxis del fotoenvejecimiento, cáncer de piel y enfermedades asociadas.
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